УДК 61

АКТИВИРОВАННЫЕ НЕЙТРОФИЛЫ, ПРОДУЦИРУЮЩИЕ HOCL, ВЫЯВЛЯЮЩИЕСЯ ПРИ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ И КОНФОКАЛЬНОЙ МИКРОСКОПИИ С ПОМОЩЬЮ ЦЕЛЕСТИНОВОГО СИНЕГО В

Опубликовано в Acta biomedica scientifica · Том 1, Номер 3, ч. 2, 2017 · Страницы 86–91 · Рубрики: новые технологии
DOI 10.12737/article_590823a4895537.04307905
Получено: 26.04.2017 Одобрено: 02.05.2017 Опубликовано: 02.05.2017
Авторы
1 Институт экспериментальной медицины (лаборатория клеточных и протеомных технологий отдела молекулярной генетики, младший научный сотрудник)
Санкт-Петербург, г. Санкт-Петербург и Ленинградская область, Россия
2 Институт экспериментальной медицины (отдел иммунологии, старший научный сотрудник)
Санкт-Петербург, г. Санкт-Петербург и Ленинградская область, Россия
3 Институт экспериментальной медицины (лаборатория биохимической генетики отдела молекулярной генетики, старший научный сотрудник)
Санкт-Петербург, г. Санкт-Петербург и Ленинградская область, Россия
4 Институт экспериментальной медицины (лаборатория клеточных и протеомных технологий отдела молекулярной генетики, аспирант (провизор), научный сотрудник)
Санкт-Петербург, г. Санкт-Петербург и Ленинградская область, Россия
5 ФГБУ ФНКЦ физико-химической медицины ФМБА России (лаборатория физико-химических методов исследования и анализа, заведующий)
Москва, г. Москва и Московская область, Россия
6 Институт экспериментальной медицины (лаборатория биохимической генетики отдела молекулярной генетики, заведующий)
Санкт-Петербург, г. Санкт-Петербург и Ленинградская область, Россия
7 Институт экспериментальной медицины (отдел молекулярной генетики, заведующий)
Санкт-Петербург, г. Санкт-Петербург и Ленинградская область, Россия
HOCl образуется при стимуляции нейтрофилов благодаря активности миелопероксидазы. Для селективной спектрофотометрической детекции HOCl предложен целестиновый синий B (CB). Целью данной работы явилась разработка флуоресцентных методов оценки продукции HOCl нейтрофилами. Продукт реакции CB с HOCl флуоресцировал при 578 нм (возбуждение 487 нм). Методом конфокальной микроскопии получили изображения активированных нейтрофилов, окрашенных CB. При проточной цитометрии флуоресценция активированных 50 нМ PMA нейтрофилов была в 5 раз выше (p < 0,05), чем у клеток без активатора.
HOCl хлорноватистая кислота миелопероксидаза целестиновый синий B нейтрофилы конфокальная микроскопия проточная цитометрия флуоресценция
Текст (PDF): Читать Скачать
Список литературы

1. Панасенко О.М., Горудко И.В., Соколов А.В. Хлорноватистая кислота как предшественник свободных радикалов в живых системах // Успехи биологической химии. - 2013. - Т. 53. - С. 195-244.

2. Соколов А.В., Голенкина Е.А., Костевич В.А., Васильев В.Б., Судьина Г.Ф. Взаимодействие церулоплазмина и 5-липоксигеназы // Биохимия. - 2010. - Т. 75, № 12. -С. 1687-1694.

3. Dypbukt JM, Bishop C, Brooks WM, Thong B, Eriksson H, Kettle AJ (2005) A sensitive and selective assay for chloramine production by myeloperoxidase. Free Radical Biology and Medicine, (39), 1468-1477.

4. Flemmig J, Zschaler J, Remmler J, Arnhold J (2012). The fluorescein-derived dye aminophenyl fluorescein is a suitable tool to detect hypobromous acid (HOBr)-producing activity in eosinophils. Journal of Biological Chemistry, (287), 27913-27923.

5. Franck T, Minguet G, Delporte C, Derochette S, Zouaoui Boudjeltia K, van Antwerpen P, Gach O, Deby-Dupont G, Mouithys-Mickalad A, Serteyn D (2015). An immunological method to combine the measurement of active and total myeloperoxidase on the same biological fluid, and its application in finding inhibitors which interact directly with the enzyme. Free Radical Research, (49), 790-799.

6. Huang J, Milton A, Arnold RD, Huang H, Smith F, Panizzi JR, Panizzi P (2016). Methods for measuring myeloperoxidase activity toward assessing inhibitor efficacy in living systems. Journal of Leukocyte Biology, (99), 541-548.

7. Malle E, Furtmüller PG, Sattler W, Obinger C (2007). Myeloperoxidase: a target for new drug development? British Journal of Pharmacology, (152), 838-854.

8. Sokolov AV, Kostevich VA, Kozlov SO, Donskyi IS, Vlasova II, Rudenko AO, Zakharova ET, Vasilyev VB, Panasenko OM (2015). Kinetic method for assaying the halogenating activity of myeloperoxidase based on reaction of celestine blue B with taurine halogenamines. Free Radical Research, (46), 777-789.

9. Weiss SJ, Klein R, Slivka A, Wei M (1982). Chlorination of taurine by human neutrophils. Evidence for hypochlorous acid generation. Journal of Clinical Investigation, (70), 598-607.

10. Urban CF, Ermert D, Schmid M, Abu-Abed U, Goosmann C, Nacken W, Brinkmann V, Jungblut PR, Zychlinsky A (2009). Neutrophil extracellular traps contain calprotectin, a cytosolic protein complex involved in host defense against Candida albicans. PLoS Pathogens, (5), e1000639.

Войти или Создать
* Забыли пароль?